为了创造更广泛的过继细胞疗法，需要对基因组进行多用途和精确的修改。近日，美国加州大学旧金山分校Alexander Marson的研究小组，发现聚合物稳定的Cas9纳米颗粒和修饰的修复模板提高了基因组编辑效率。研究组报告了两项改进，这些改进在临床相关的原代细胞类型中提高了基于CRISPR–Cas9的基因组编辑的效率。在同源指导的修复（HDR）模板末端添加的截短的Cas9靶序列（tCTS）与Cas9核糖核蛋白（RNP）相互作用，将模板转运至细胞核，从而将HDR效率提高了约2-4倍。此外，用多聚谷氨酸将Cas9 RNP稳定在纳米颗粒中，可进一步提高编辑效率约两倍，降低毒性，并能冻干保存而不损失活性。将这两种改进相结合，即使在减少HDR模板剂量的情况下，也可以提高基因靶向效率，在多种细胞类型（例如大体积（CD3⁺）T细胞、CD8⁺ T细胞、CD4⁺ T调节性T细胞（Tregs）、γδT细、B细胞、自然杀伤细胞以及原代和诱导多能干细胞衍生的造血干祖细胞（HSPC））中的多个基因组位点上产生的活编辑细胞数量大约是其两倍至六倍。

David N. Nguyen, Theodore L. Roth, P. Jonathan Li, et al. Polymer-stabilized Cas9 nanoparticles and modified repair templates increase genome editing efficiency. Nature Biotechnology, 2019.

DOI: 10.1038/s41587-019-0325-6

https://www.nature.com/articles/s41587-019-0325-6