通过内源性细胞代谢途径(如磷脂和糖)进行生物正交代谢标记是有效标记活病毒的一种很有前途的方法。然而,由于缺乏宿主来源的包膜,标记无包膜病毒仍然是一个巨大的挑战。近日,中国科学院深圳先进技术研究院蔡林涛和马轶凡等研究人员,开发了一种新的生物正交标记策略,利用蛋白质合成途径来标记和追踪无包膜病毒。结果表明,在病毒蛋白的生物合成和组装过程中,l-叠氮高丙氨酸(AHA)取代蛋氨酸残基,比叠氮糖更能有效地将叠氮基序引入病毒衣壳蛋白中。叠氮修饰的EV71(N3-EV71)颗粒随后通过原位生物正交反应被二苯并环辛基(DBCO)功能化的荧光探针有效地标记,并具有良好的病毒感染性。双标记成像清楚地表明,EV71病毒粒子主要与清道夫受体结合,并通过网状蛋白介导的内吞作用内化。然后病毒颗粒被运送到早期和晚期的内吞体内,在那里病毒RNA在感染后大约70分钟以低pH依赖的方式释放。这些结果首先揭示了病毒的转运和脱衣机制,该研究有助于阐明EV71感染的发病机制,并有助于抗病毒药物的发现。
Fangfang Wang, Hong Pan, Xiangjie Yao, et al. Bioorthogonal Metabolic Labeling Utilizing Protein Biosynthesis for Dynamic Visualization of Nonenveloped Enterovirus 71 Infection. ACS Applied Materials & Interfaces, 2020.
DOI: 10.1021/acsami.9b17412
https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acsami.9b17412