同源非依赖的靶向整合(HITI)策略使CRISPR/Cas9介导的治疗基因在体内未分裂细胞中得到有效的敲击，有望成为治疗X连锁青少年视网膜劈裂等遗传性疾病的通用治疗方案。有鉴于此，美国加利福尼亚大学的Paul S. Weiss、Hsian‐Rong Tseng和中国台北荣民总医院的Shih‐Hwa Chiou等研究人员，超分子纳米颗粒（SMNP）载体被用于两个DNA质粒CRISPR-Cas9基因组编辑系统和一个治疗基因的共传递，该治疗基因使RS1基因与HITI的RS1基因的CRISPR-相关蛋白9（CRISPR/Cas9）敲入具有规则间隔的簇状短回文重复序列（CRISPR）成为可能。

本文要点

1）通过小规模的组合筛选，确定了两种具有最佳传递性能的SMNP载体，其中一种为Cas9和单导RNA（sgRNA）质粒，另一种为供体RS1和绿色荧光蛋白（GFP）质粒。

2）然后利用这些SMNP载体在体外和体内将RS1/GFP基因的CRISPR/Cas9敲入小鼠Rosa26位点。

3）体内研究包括将两种SMNP载体注入小鼠眼睛内，然后通过眼底照相机和光学相干断层扫描进行重复眼部成像，以及对采集的视网膜组织进行病理和分子分析。

4）小鼠眼部器官保持其解剖完整性，一个单拷贝的3.0 kb RS1/GFP基因被精确整合到视网膜Rosa26位点，整合的RS1/GFP基因在视网膜中表达，显示RS1/GFP基因的CRISPR/Cas9敲除。

参考文献：

Shih‐Jie Chou, et al. Dual Supramolecular Nanoparticle Vectors Enable CRISPR/Cas9‐Mediated Knockin of Retinoschisin 1 Gene—A Potential Nonviral Therapeutic Solution for X‐Linked Juvenile Retinoschisis. Advanced Science, 2020.

DOI：10.1002/advs.201903432

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1002/advs.202000111