目前,人类多能干细胞(hPSC)分化为心肌细胞以增强其纯度的过程需要一些费时费力的纯化过程。为此,温州医科大学附属眼视光医院Akon Higuichi 研究员课题组开发了一种热响应性聚合物细胞分选板,用于简便地纯化hPSC衍生的心肌细胞。
图 | hPSC来源的心肌细胞的细胞分选原理示意图。
本文要点
1)该细胞分选板是由热敏性聚(N-异丙基丙烯酰胺)的涂层和细胞外基质蛋白制备而成。研究人员将hPSCs在涂有“层粘连蛋白-521(laminin-521)”的热敏表面诱导成心肌细胞,在分化后的15天,将细胞培养板的温度降至8-9 ℃,使细胞部分脱离热敏表面,从板上分离的细胞约能表达90%的纯度。
图 | hPSC衍生的心肌细胞的生成。
2)从热响应性聚合物表面分离的细胞具有高纯度的原因可以解释为,与未分化的hPSC相比,hPSC衍生的心肌细胞在细胞培养生物材料上的粘附力较弱。
图 | hESC衍生的心肌细胞在热响应和非热响应表面的表征。
3)使用常规细胞选择纯化后,分离的细胞显示出比热响应表面上的其余细胞以及心肌细胞更高的cTnT心肌细胞标记。分离的细胞表达了几种心肌细胞标志物,例如α-肌动蛋白,MLC2a和NKX2.5。
图 | hPSC衍生的心肌细胞在热反应和非热反应表面的表征。
综上,这项研究展示了一种使用热响应性聚合物平板对hPSC衍生的心肌细胞进行分选的新方法,无需常规费力。这种在具有热响应性的聚合物表面上的细胞分选过程(细胞分选板的构想)可用于纯化从干细胞分化而来的其他细胞谱系,因为它仅需降低热敏聚合物板的温度即可纯化细胞。
参考文献:
Tzu-Cheng Sung et al. Efficient differentiation of human pluripotent stem cells into cardiomyocytes on cell sorting thermoresponsive surface. Biomaterials. 2020.
https://doi.org/10.1016/j.biomaterials.2020.120060