结直肠癌(CRC)的特征是患者之间存在显著的遗传和表型异质性。有鉴于此，为促进高通量遗传测试和肿瘤驱动程序的功能鉴定，德国癌症研究中心(DKFZ)Henner F. Farin等研究人员，利用体内外CRISPR-Cas9汇集筛选，鉴定出人结肠类器官中的肿瘤抑制因子。

本文要点

1）研究人员开发了一个平台，可用于在人类结肠类器官中进行CRISPR-Cas9汇集筛选。使用转化生长因子β（TGF-β）抗性作为建立体外敏感性和可扩展性的范例，研究人员确定了在3D类器官中筛选的最佳条件和严格的向导RNA（gRNA）要求。

2）然后，研究人员使用APC^-/-在恶性前类器官中筛选了全癌肿瘤抑制基因（TSG）库； KRAS G12D突变被异种移植以研究复杂肿瘤微环境中的克隆优势。研究人员确定TGFBR2是最普遍的TSG，其次是已知和未知的结直肠癌（CRC）生长介导因子。

3）在二级筛选中使用唯一的分子标识符（UMI）对gRNA进行了验证，从而可以调整克隆的漂移并区分克隆的大小和丰度。

总之，这些发现突出了一个强大的基于类器官的平台，可用于针对患者特定功能基因组学的汇集CRISPR-Cas9筛选。

参考文献：

Birgitta E. Michels, et al. Pooled In Vitro and In Vivo CRISPR-Cas9 Screening Identifies Tumor Suppressors in Human Colon Organoids. Cell Stem Cell, 2020.

DOI：10.1016/j.stem.2020.04.003

https://www.cell.com/cell-stem-cell/fulltext/S1934-5909(20)30142-9