microRNAs(miRNAs)作为癌症早期临床诊断的潜在生物标志物已被广泛研究。开发具有高特异性、高灵敏度、高可开发性的miRNA检测平台势在必行。电化学发光(ECL)是一种电致化学发光技术,可以大大降低背景噪声,提高检测灵敏度。纸基ECL生物传感器的开发进一步使ECL适合于即时检测。近年来,簇状规则间隔短回文重复序列(CRISPR)/Cas13a作为高保真、高效、且可编程的CRISPR RNA(crRNA)引导的RNase,催生了新一代生物传感技术的发展。然而,现有的基于CRISPR/Cas13a的检测往往面临灵敏度和特异性之间的权衡。有鉴于此,华南师范大学邢达、黄茹等人构建了一种以CRISPR/Cas13a为动力的便携式ECL芯片(PECL-CRISPR)。
本文要点:
1)在此便携式PECL-CRISPR中,靶miRNA激活Cas13a以裂解精心设计的预引物,并触发随后的指数扩增和ECL检测。
2)在优化的条件下,miR-17的检出限为1×10−15M。
3)通过对crRNA的合理设计,此平台可以提供单核苷酸分辨率,以显著区分miRNA靶点及其高度同源的家族成员。
4)此外,“光开关”分子[Ru(Phen)2dppz]2+的引入,使平台避免了繁琐的电极修饰和清洗过程,从而简化了实验程序,降低了测试成本。
5)肿瘤细胞miRNA的分析结果表明,PECL-CRISPR平台在分子诊断方面具有广阔的应用前景。
Ting Zhou, et al. CRISPR/Cas13a Powered Portable Electrochemiluminescence Chip for Ultrasensitive and Specific MiRNA Detection. Adv. Sci., 2020.
DOI: 10.1002/advs.201903661
https://doi.org/10.1002/advs.201903661