利用蛋白质和小分子等功能探针对靶基因进行位点特异性询问，对于破译基因功能的分子基础和设计调控其下游效应的工具至关重要。在这种情况下，基于CRISPR的基因编辑和靶向技术被证明是非常有用的，因为它们可以通过简单地改变单导RNA(sgRNA)的序列来编程，以靶向任何目的基因。尽管这些技术被广泛应用于基因编码功能蛋白的发现，但由于缺乏合适的技术，CRISPR系统在小分子显示方面的应用还不完善。有鉴于此，印度科学教育与研究学院Seergazhi G. Srivatsan、科学与工业研究理事会Debojyoti Chakraborty、Souvik Maiti等人设计了一种名为sgRNA-Click(sgR-CLK)的创新技术，利用生物正交点击化学技术重塑引导RNA在目标基因上显示合成分子。

本文要点：

1）sgR-CLK采用了一种新颖的转录后化学酶标记平台，其中末端尿苷酸转移酶(TUTase)被重新利用，通过在3'端对多个叠氮修饰的核苷酸类似物进行位点特异性剪裁来生成可点击的sgRNA。其中，微创叠氮手柄的存在确保了sgRNAs起作用。

2）值得注意的是，一个以端粒重复序列的叠氮尾sgRNA在CRISPR-dCas9系统上充当了特洛伊木马，通过铜催化或菌株促进的点击反应引导合成标签(生物素)位点-特异性位于染色质上。

综上所述，sgR-CLK在生物正交化学、TUTase和CRISPR工具箱的应用方面取得了重大进展，为小分子探针定点显示和靶基因的诊断工具的提供一个简化的解决方案。

Jerrin Thomas George, et al. Terminal Uridylyl Transferase Mediated Site-Directed Access to Clickable Chromatin Employing CRISPR-dCas9. J. Am. Chem. Soc., 2020.

DOI: 10.1021/jacs.0c06541

https://doi.org/10.1021/jacs.0c06541