研究表明，Cas13a系统在RNA干扰和分子诊断领域具有巨大的潜力。然而，由于缺乏crRNA设计指南，阻碍了Cas13a系统在RNA编辑和单核苷酸多态性鉴定中的实际应用。在此，上海交通大学丁显廷、郅晓等人经研究认为带有发夹间隔的crRNA可以提高CRISPR/Cas13a系统(称为hs-CRISPR)的特异性。

本文要点：

1）Gibbs自由能分析表明，发夹间隔crRNA (hs-crRNA)抑制Cas13a与非靶标RNA的亲和力。

2）为了进一步验证hs‐CRISPR/Cas13a系统的高特异性，建立了一个乙型肝炎病毒DNA分型平台。与普通crRNA相比，hs‐crRNA在不牺牲CRISPR/Cas13a系统的敏感性的前提下，将特异性提高了三倍。

3）此外，通过理论模拟阐明了Cas13a/hs‐crRNA/靶RNA组成的机制，研究结果表明发夹间隔crRNAs与传统的Cas13a系统兼容。

综上所述，此工作建立在对Cas13a激活的基本认知之上，为CRISPR/Cas13a系统crRNA的合理设计提供了重要的改进。

Yuqing Ke, et al. Hairpin‐Spacer crRNA‐Enhanced CRISPR/Cas13a System Promotes the Specificity of Single Nucleotide Polymorphism (SNP) Identification. Adv. Sci., 2021.

DOI: 10.1002/advs.202003611

https://doi.org/10.1002/advs.202003611