需要对酶进行系统且广泛的研究以揭示它们高催化效率的机制,从而解决当前医学和工程领域所面临的难题。有鉴于此,美国斯坦福大学的P. M. Fordyce和D. Herschlag等研究人员,通过高通量微流体酶动力学揭示了酶的功能结构。
本文要点
1)研究人员研发了HT-MEK(高通量微流体酶动力学),这是一个微流控平台,单次实验可实现对1500多种酶变体进行高通量表达、纯化和表征。
2)对于碱性磷酸酶PafA(黄杆菌的磷酸不可抑制碱性磷酸酶)的1036个突变体,研究人员进行了超过670,000次反应,并确定了多种底物和抑制剂的5000多个动力学和物理常数。
3)研究发现了错误折叠状态下的广泛动力学区室和独立的催化作用,揭示了与特定功能相关的残基空间连续区域。
4)这些区域包括活性位点近端的残基,但延伸到酶表面,提供了现有方法无法获得的底层结构图。
本文研究表明,HT-MEK具有从揭示分子机制到医学、工程和设计等方面的广泛应用。
参考文献:
C. J. Markin, et al. Revealing enzyme functional architecture via high-throughput microfluidic enzyme kinetics. Science, 2021.
DOI:10.1016/j.ccell.2021.06.016
https://science.sciencemag.org/content/373/6553/eabf8761