主要蛋白酶(Mpro)和木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)在SARS-CoV-2的复制过程中发挥着重要作用,因此也是抗病毒抑制剂的重要靶点。对Mpro和PLpro进行同时可视化对于SARS-CoV-2的检测和抑制剂快速筛选而言非常重要。然而,由于缺乏合适的探针,因此如何实现这一目标仍然具有很大的挑战性。加州大学圣地亚哥分校Jesse V. Jokerst开发了一种双色探针3MBP5,它能通过荧光(或Förster)共振能量转移(FRET)以同时检测Mpro和PLpro。
本文要点:
(1)该探针能够通过Mpro和PLpro切割产生的Cy3和Cy5荧光团以产生荧光。研究人员也通过重组蛋白、抑制剂、质粒转染的HEK 293T细胞和SARS-CoV-2感染的TMPRSS2-Vero细胞等实验证明了3MBP5具有可被特异性激活的性能。
(2)实验结果和表明,该双色探针能够首次实现对SARS-CoV-2 Mpro和PLpro的同时检测和细胞内分布研究,由此表明该探针在同时检测不同的蛋白酶和抑制剂快速筛选方面具有重要的应用价值。
Yong Cheng. et al. A Dual-Color Fluorescent Probe Allows Simultaneous Imaging of Main and Papain-like Proteases of SARS-CoV-2-Infected Cells for Accurate Detection and Rapid Inhibitor Screening
DOI: 10.1002/anie.202113617
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/anie.202113617