快速、高效地分离完整的溶酶体对于利用蛋白质组学分析以研究其功能和代谢产物而言是非常重要的。日本先进科学技术研究所Shinya Maenosono开发了一种快速、稳健、基于纳米粒子的磁性分离方法，该方法通过将磁性等离激元混合纳米粒子(MPNPs)与氨基葡聚糖(aDxt)结合，使其可以通过内吞途径靶向到溶酶体的腔内。

本文要点：

（1）为了实现溶酶体的定向磁性分离，实验需要对于偶联aDxt的MPNPs(aDxt-MPNPs)在内吞作用通路中的胞内运输过程进行示踪。因此，实验通过研究aDxt-MPNPs等离激元散射的时间依赖性共定位和利用阈值曼德斯共定位系数(R_t)进行细胞器免疫染色标记蛋白研究，对aDxt-MPNPs的胞内转运过程进行了分析。通过对早期和晚期核内体和溶酶体R_t的时间变化进行详细分析后，研究者可以推导出aDxt-MPNPs在细胞中的转运动力学。

（2）确定了aDxt-MPNPs在溶酶体中实现充分积累所需的孵育时间后，研究者能够对溶酶体进行尽可能完整地磁性分离。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和氨基酸分析方法，通过改变溶酶体从匀浆到完全分离的时间(t_delay)和温度(T)，考察t_delay和T对溶酶体蛋白组成的影响。研究发现，溶酶体的完整性会很快受到损害，为了尽可能完整地分离溶酶体并获得较高的纯度，最佳的设置条件为t_delay=30 min和T=4 ℃。

The Son Le. et al. Quick and Mild Isolation of Intact Lysosomes Using Magnetic−Plasmonic Hybrid Nanoparticles. ACS Nano. 2022

DOI: 10.1021/acsnano.1c08474

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acsnano.1c08474