Anal. Chem: 检测末端脱氧核苷酸转移酶活性的自定义多通道指数放大 系统
念心 念心 2022-08-07

末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的发现和功能分析为白血病机制的理解增加了一个新维度,并且加速了白血病诊断方法的发展。基于此,合肥工业大学陈伟和徐建国等人利用 TdT 的固有特性,仅使用单链 DNA 作为核酸底物进行 DNA 合成,开发了一种用于 TdT 活性荧光传感的自定义多通道指数放大 (SMEA) 系统。 

本文要点:

(1)SMEA 设计采用分子间 DNA 相互作用,由结合切口位点的延伸引物 (EP) 和结合切口位点的多胸腺嘧啶尾分子信标 (Poly-T-MB) 制成。TdT 的缺失无法弥合 EP 和 Poly-T-MB 之间的关系,从而确保 SMEA 具有超低背景。然而,TdT 的存在导致 EP 在 dATP 池下延伸为聚腺嘌呤尾 EP (Poly-A-EP),该 dATP 池负责与许多 Poly-T-MB 进一步杂交。

(2)借助聚合酶和切口酶与Poly-A-EP/(Poly-T-MB)n的杂交产物反应,在许多循环和通道中引起双向链切口、聚合和置换。在这种情况下,作者发现 SMEA 与所有 Poly-T-MB 的配置转换和分裂相关,从而显着增强荧光。凭借这种高目标信号放大和强大的背景抑制能力,SMEA传感系统对TdT活性的定性和定量测定非常强大,表明它在生物医学研究和疾病诊断方面具有很大的应用前景。

参考文献:

Huijie Shang, Yubo Peng, Li Yao, Zhi Zheng, Hongxia Li, Wei Chen, and Jianguo Xu. Self-Customized Multichannel Exponential Amplifications Regulate Powered Monitoring of Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Activity. Anal. Chem. 2022DOI:10.1021/acs.analchem.2c02427

https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c02427


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