基质金属蛋白酶-14 (MMP-14)通过水解间质胶原蛋白可促进癌症进展,允许肿瘤细胞逃逸和种子转移。此外,MMP-14在乳腺癌组织中的上调使该蛋白酶成为肿瘤诊断和治疗的重要药物靶点。鉴于此,佛罗里达州立大学Hedi Mattoussi课题组详细介绍了量子点(QD) -染料缀合物的组装和表征,该缀合物通过识别乳腺癌生物标志物─基质金属蛋白酶-14 (MMP-14)并与之相互作用的肽桥构建而成。然后将组装的QD共轭物用作光学可寻址探针,依靠Förster共振能量转移(FRET)相互作用作为一种传导机制来检测MMP-14在溶液相中的活性。
本文要点:
(1)量子点首先被二噻唑烷聚乙二醇(PEG)包被,PEG含有羧基,允许通过酰胺键形成与不同染料标记的多肽耦合。结合物的分析能力是通过将FRET效率与共轭价和/或量子点与染料分离距离的变化相关联来实现的,这些变化由表面栓系肽的酶蛋白水解触发和调节。FRET探针对酶消化具有很高的灵敏度,检测极限在亚纳摩尔。
(2)作者在Michaelis-Menten模型的框架内进一步分析了蛋白质水解数据,该模型考虑了表面附着肽的扩散系数比自由肽慢的事实。这导致碰撞频率降低,催化效率降低,kcat/KM。结果表明,该共轭设计是有希望的,有效的,并可能对体内分析有用。
参考文献:
Zhicheng Jin, Narjes Dridi, Goutam Palui, Valle Palomo, Jesse V. Jokerst, Phillip E. Dawson, Qing-Xiang Amy Sang, and Hedi Mattoussi. Quantum Dot–Peptide Conjugates as Energy Transfer Probes for Sensing the Proteolytic Activity of Matrix Metalloproteinase-14. Anal Chem 2023
DOI:10.1021/acs.analchem.2c03400
https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c03400