免疫球蛋白G(IgG)片段可结晶(Fc)糖基化调节效应器功能,如抗体依赖性细胞毒性和补体依赖性细胞毒。因此,评估IgG-Fc糖基化对于理解抗体在感染性、同种免疫性和自身免疫性疾病中的作用很重要。鉴于此,来自莱顿大学医学中心的Manfred Wuhrer和David Falck等人开发了GlYcoLISA,一种通过液相色谱-质谱(LC–MS)读数的免疫吸附测定法测定抗原特异性IgG的Fc糖基化的技术。具有足够聚糖分辨率的替代方法缺乏这些重要的特异性。
文章要点:
1) 该技术主要是通过蛋白水解切割后基于LC–MS的糖肽分析,以亚类和位点特异性的方式检测抗原特异性IgG糖基化,GlYcoLISA通过使用公认的免疫吸附测定法,利用固定化抗原纯化所需特异性的抗体,解决了与特异性IgG的低丰度和总IgG的高背景有关的挑战;
2) 此外,GlYcoLISA以96孔板型进行,160个样品的分析耗时约5天,其中1天用于样品制备,2天用于LC–MS测量,2天进行部分自动化数据处理,当然,研究也提到GlYcoLISA需要LC–MS操作和数据处理方面的专业知识。
参考资料:
Falck, D., Wuhrer, M. GlYcoLISA: antigen-specific and subclass-specific IgG Fc glycosylation analysis based on an immunosorbent assay with an LC–MS readout. Nat Protoc (2024).
10.1038/s41596-024-00963-7
https://doi.org/10.1038/s41596-024-00963-7